硫酸粘桿菌素最近EP標(biāo)準(zhǔn)((EP4.6)
定義：
本品為特定的多粘芽孢菌變種粘桿菌素菌種制成或由其它方法獲得的聚縮氨硫酸酸鹽混合物。
含量：
以干品計、Colistin E1,E2,E3各E1-I和E1-7MOA的總含量不低于77.0%。
以干品計，Colistin E1-I不高于10.0%。
以干品計，Colistin E1-7MOA不高于10.0%。
以干品計，Colistin E3不高于10.0%。
性狀：
本品為白色或類白色粉末，有吸濕性，易溶于水，微溶于酒精，幾乎不溶于丙酮和乙醚。
鑒別：
首要鑒別法：B、E
次要鑒別法：A、C、D、E
A 用薄層色譜法檢查（2.2.27）
供試溶液：
將5mg待檢物質(zhì)溶于1ml鹽酸和水（等量混合）的混合液中，置于封閉管中于135℃下加熱5小時。水浴中蒸發(fā)到干燥，繼續(xù)加熱至濕潤的藍(lán)色石蕊試紙不再變紅。將殘渣溶于0.5ml的水中。
● 參比溶液（a）：將20mg亮氨酸溶于水中，并用相同的溶劑稀釋至10ml。
● 參比溶液（b）：將20mg蘇氨酸溶于水中，并用相同的溶劑稀釋至10m。
● 參比溶液（a）：將20mg苯丙氨酸溶于水中，并用相同的溶劑稀釋至10m。
● 參比溶液（d：）將20mg絲氨酸溶于水中，并用相同的溶劑稀釋至10m。
板：TLC硅膠G板
流動相：水，苯酚（25：75V/V）
避光進(jìn)行以下操作程序：
點樣：5ul點樣成10mm帶狀
將板置于色譜溶器中，使其不與流動相接觸，注入蒸汽至少12小時。
展開：展開超過12cm長,
干燥：100~105℃烘干，
檢測：用茚三酮溶液噴涂，于100℃下加熱5分鐘。
結(jié)果：供試溶液的色譜中顯示出于參比溶液(a)和參比溶液(b)所得色譜相對應(yīng)的區(qū)域，但沒有顯示出參比溶液(c)和(d)的區(qū)域，供試溶液中還顯示了很低的RF值（2，4－二氨丁酸）。
B 檢查所得色譜的含量
結(jié)果：在供試溶液的色譜中得到的ColistinE1和ColistinE2的峰的保留時間與在參比溶液（a）的色譜中對照的峰是相似的。
C 將5mg溶解于3ml的水中，加入3ml稀氫氧化鈉溶液，加入0.5mL10g/1的硫酸銅溶液，有紫色產(chǎn)生。
D 將約50mg溶解于1mL1M的鹽酸中，并加入0.5mL0.01M的碘，溶液顏色不變。
E 本品顯硫酸鹽的特征反應(yīng)。
測試：
PH：4.0~6.0
溶解0.1g無二氧化碳的水中，并用相同的溶劑稀釋至10ml。
比旋度：－63~－73（干品）
溶解1.25g于水中，并用相同的溶劑稀釋至25ml。
有關(guān)物質(zhì)：
液相色譜法（2.2.29），使用歸一法。
供試溶液：
將25.0mg樣品溶于40ml的水中，并用乙腈稀釋至50.0mL。
參比溶液（a）：
將25.0mg的硫酸粘桿菌素CRS溶于40ml的水中，產(chǎn)用乙腈稀釋至50.0 mL。
參比溶液（b）：
用水和乙腈的混合液（20：80）稀釋至1.0ml的參比溶液（a）至1.00ml。
柱子：
――――尺寸：L＝0.15m,φ=4.6mm
――――固定相：色譜用頂蓋十八硅烷硅膠。
――――溫度：30℃
流動相：22 溶積的乙腈和78溶積的以下述程序配制的溶液的混合液。
將4.46g無水硫酸鈉溶于900ml的水中，加入2.5ml的磷酸，然后用水（PH2.3~2.5）稀釋到100ml。
流速：1.0ml/min
檢測：215nm下分光光度計檢測。
運行時間：ColistinE1保留時間的1.5倍。
相對于ColistinE1（保留時間大約為16 min）的相對保留時間；
ColistinE2大約為0.45，ColistinE3大約為0.5，ColistinE1-I大約為0.8，ColistinE1-7MOA大約為1.1。
系統(tǒng)適應(yīng)性：參比溶液（a）:
――――分離度：在ColistinE3和ColistinE1之間的峰的分離不得低于8.0，在ColistinE2和ColistinE1-I之間的峰的分離不得低于6.0，在ColistinE1-I和ColistinE1之間的峰的分離不得低于2.5，在ColistinE1和ColistinE1-7MOA之間的峰的分離不得低于1.5。
――――所得的色譜應(yīng)該與硫酸粘桿菌素CRS的相對應(yīng)。
限度：
――――單雜：不高于4.0%。
――――總雜：不高于23.0%。
忽略限度：
參比溶液（b）色譜中ColistinE1相應(yīng)峰的而積，忽略ColistinE2，E3，E1和E1-7MOA相應(yīng)的峰。
硫酸鹽：
以干品計，含16.0 %~18.0%的硫酸鹽（SO4）。
將0.250g溶解于100ml的水中，用濃氨將溶液的PH值調(diào)至11，加10.0mL0.1M的氯化鋇和約0.5mg的酚酞紫。用0.1M的依地酸鈉滴定，當(dāng)溶液的顏色開始變化時加入50ML的酒精，繼續(xù)滴定直到藍(lán)色消失。
1mL0。1M的氯化鋇相當(dāng)于9.606ml的硫酸鹽（SO4）。
干燥失重：
減失重量不得過3.5%，取本品1g，與60℃下用五氧化二磷干燥3小時，并保持壓力不超過670Pa。
硫酸鹽灰粉：
取本品1.000g，灰粉不得過1.0%
含量：
液相色譜法（2.2.29），如有關(guān)物質(zhì)項下所述進(jìn)行，做以下修改：
注射：供試溶液和參比溶液（a）
用參比溶液（a）得到的色譜對照標(biāo)準(zhǔn)品（CRS）聲明的含量來分別計算ColistinE2、E3、E1-I、E1和E1-7MOA百分含量的總和，E3的百分含量，E1-I的百分含量，E1-7MOA百分含量。
貯藏：密封，避光保存。
